qimme學習 三個示例的質控和特徵表創建(Sequence quality control and feature table construction)

質控工具:DADA2, Deblur, basic quality-score-based filtering(任一個)

產出文件:FeatureTable[Frequency] 特徵表    每個樣品裏面每個唯一序列的個數

                    FeatureData[Sequence] 特徵數據    每個樣品裏面的唯一序列,跟特徵表對應

示例1、

方法1:DADA2

qiime dada2 denoise-single \
  --i-demultiplexed-seqs demux.qza \
  --p-trim-left 0 \    (後面的數字表示從序列的第number位點開始截取,位點前面的捨棄,參考demux.qzv鹼基質量)
  --p-trunc-len 120 \    (後面的數字表示截取結束位點,參考demux.qzv鹼基質量)   
  --o-representative-sequences rep-seqs-dada2.qza \
  --o-table table-dada2.qza \
  --o-denoising-stats stats-dada2.qza

qiime metadata tabulate \
  --m-input-file stats-dada2.qza \
  --o-visualization stats-dada2.qzv

mv rep-seqs-dada2.qza rep-seqs.qza
mv table-dada2.qza table.qza

方法2:Deblur

qiime quality-filter q-score \
 --i-demux demux.qza \
 --o-filtered-sequences demux-filtered.qza \
 --o-filter-stats demux-filter-stats.qza

qiime deblur denoise-16S \
  --i-demultiplexed-seqs demux-filtered.qza \
  --p-trim-length 120 \
  --o-representative-sequences rep-seqs-deblur.qza \
  --o-table table-deblur.qza \
  --p-sample-stats \
  --o-stats deblur-stats.qza

qiime metadata tabulate \
  --m-input-file demux-filter-stats.qza \
  --o-visualization demux-filter-stats.qzv
qiime deblur visualize-stats \
  --i-deblur-stats deblur-stats.qza \
  --o-visualization deblur-stats.qzv

示例2、

DaDa2:

qiime dada2 denoise-single \
  --p-trim-left 13 \
  --p-trunc-len 150 \
  --i-demultiplexed-seqs fmt-tutorial-demux-1.qza \
  --o-representative-sequences rep-seqs-1.qza \
  --o-table table-1.qza \
  --o-denoising-stats stats-1.qza
qiime dada2 denoise-single \
  --p-trim-left 13 \
  --p-trunc-len 150 \
  --i-demultiplexed-seqs fmt-tutorial-demux-2.qza \
  --o-representative-sequences rep-seqs-2.qza \
  --o-table table-2.qza \
  --o-denoising-stats stats-2.qza

qiime feature-table merge \(合併不同處理組,不同於示例3的雙端合併)
  --i-tables table-1.qza \
  --i-tables table-2.qza \
  --o-merged-table table.qza
qiime feature-table merge-seqs \
  --i-data rep-seqs-1.qza \
  --i-data rep-seqs-2.qza \
  --o-merged-data rep-seqs.qza

示例3、

DaDa2:

qiime dada2 denoise-paired \(DaDa2可以雙端合併)
  --i-demultiplexed-seqs demux.qza \
  --p-trim-left-f 13 \
  --p-trim-left-r 13 \
  --p-trunc-len-f 150 \
  --p-trunc-len-r 150 \
  --o-table table.qza \
  --o-representative-sequences rep-seqs.qza \
  --o-denoising-stats denoising-stats.qza
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